Characterization of acetohydroxyacid synthase from the hyperthermophilic bacterium Thermotoga maritima
Notice bibliographique
Résumé
Acetohydroxyacid synthase (AHAS) is the key enzyme in branched chain amino acid biosynthesis pathway. The enzyme activity and properties of a highly thermostable AHAS from the hyperthermophilic bacterium Thermotoga maritima is being reported. The catalytic and regulatory subunits of AHAS from T. maritima were over-expressed in Escherichia coli . The recombinant subunits were purified using a simplified procedure including a heat-treatment step followed by chromatography. A discontinuous colorimetric assay method was optimized and used to determine the kinetic parameters . AHAS activity was determined to be present in several Thermotogales including T. maritima . The catalytic subunit of T. maritima AHAS was purified approximately 30-fold, with an AHAS activity of approximately 160±27 U/mg and native molecular mass of 156±6 kDa. The regulatory subunit was purified to homogeneity and showed no catalytic activity as expected. The optimum pH and temperature for AHAS activity were 7.0 and 85 °C, respectively. The apparent K m and V max for pyruvate were 16.4±2 mM and 246±7 U/mg, respectively. Reconstitution of the catalytic and regulatory subunits led to increased AHAS activity. This is the first report on characterization of an isoleucine , leucine , and valine operon ( ilv operon) enzyme from a hyperthermophilic microorganism and may contribute to our understanding of the physiological pathways in Thermotogales . The enzyme represents the most active and thermostable AHAS reported so far.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».