A rapid method for the isolation of Eosinophils without Ficoll or RBC Lysis (38.1)
Notice bibliographique
Résumé
Abstract Eosinophils typically comprise 1–5% of blood leucocytes in non-allergic, healthy humans. Allergic and asthmatic reactions result in activation of eosinophils with resultant release of cytoplasmic granules, cytokines and lytic enzymes. Eosinophils are also mediators of responses against parasitic infections. Many protocols for their isolation stress the avoidance of ammonium chloride lysis as this interferes with eosinophil antigen processing, cytokine responses and alters cell morphology. We describe a rapid and simple method for the enrichment of eosinophils from normal blood that does not require Ficoll or lysis steps and yields good purity and recovery. Blood was collected with heparin and RBC were removed by HetaSep sedimention. The eosinophils were then enriched using immunomagnetic, column-free negative selection (EasySep®). Briefly, cells were labeled with a cocktail of antibodies targeting unwanted cells. These were then coupled to magnetic nanoparticles and the sample was placed in a magnet. The labeled cells were thus removed leaving unlabeled eosinophils. The entire separation procedure can be automated with a pipetting robot (RoboSep®). Purity of eosinophils assessed by cytospin and Wright’s stain was 98–99%. By flow cytometry (FACS) eosinophils were defined as CD45+CD66b+ and CD16 negative with low side scatter. Final purity assessed by FACS was 94 ± 3%. Recovery averaged 69 ± 21 (n=11).
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,003 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,003 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,002 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,016 | 0,023 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».