An engineered right‐handed coiled coil domain imparts extreme thermostability to the KcsA channel
Notice bibliographique
Résumé
KcsA, a potassium channel from Streptomyces lividans, was the first ion channel to have its transmembrane domain structure determined by crystallography. Previously we have shown that its C‐terminal cytoplasmic domain is crucial for the thermostability and the expression of the channel. Expression was almost abolished in its absence, but could be rescued by the presence of an artificial left‐handed coiled coil tetramerization domain GCN4. In this study, we noticed that the handedness of GCN4 is not the same as the bundle crossing of KcsA. Therefore, a compatible right‐handed coiled coil structure was identified from the Protein Data Bank and used to replace the C‐terminal domain of KcsA. The hybrid channel exhibited a higher expression level than the wild‐type and is extremely thermostable. Surprisingly, this stable hybrid channel is equally active as the wild‐type channel in conducting potassium ions through a lipid bilayer at an acidic pH. We suggest that a similar engineering strategy could be applied to other ion channels for both functional and structural studies. Structured digital abstract MINT‐7260032 : kcsA (uniprotkb: P0A334 ) and kcsA (uniprotkb: P0A334 ) bind ( MI:0407 ) by molecular sieving ( MI:0071 ) MINT‐7260022 : kcsA (uniprotkb: P0A334 ) and kcsA (uniprotkb: P0A334 ) bind ( MI:0407 ) by circular dichroism ( MI:0016 )
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».