57 INVESTIGATION OF CYNOMOLGUS MONKEY (MACACA FASCICULARIS) FETUS FIBROBLAST CELL NUCLEAR TRANSFER
Notice bibliographique
Résumé
Use of nuclear transfer (NT) in the cynomolgus monkey to establish tailor-made ES cells with the final goal of cloned embryo production was investigated. Activation stimulus conditions previously confirmed in parthenote production were used. Injection method NT was conducted using cynomolgus monkey fetus fibroblast cells in order to investigated the time it takes, from injection to activation, to reprogram the donor nuclei. Oocytes were collected under laparoscopic observation from mature cynomolgus monkeys 40 h after hCG (400 IU/kg) administration 9 days after follicle stimulation by i.m. injection of FSH (25 IU/kg). Donor cells, 40-day-old fetus fibroblast cells, were cultivated and synchronized at G0/G1 phase. After mature (MII) oocytes were enucleated using a Piezo-drive unit, donor cells were injected. At 2 h (Experiment 1, E1) and 4 h (Experiment 2, E2) after donor cell injection, activation was carried out by 2-min treatment with ionomycin and cultivation by 6-dimethylaminopurine for 4 h. As a control, parthenote production was carried out under the same activation conditions as NT. After activation, in vitro culture was carried out for about 9 days under conditions of 38°C, 5% CO2, and 5% O2. Whole-mount specimens of NT embryos were made immediately post-injection, 2 and 4 h post-injection, and 2 h after activation. Pronuclear formation (PN) and cleavage rates of NT embryos were 82.1% and 95.7% for E1, and 53.8% and 92.8% for E2, respectively. Control PN and cleavage rates were each 100%. Subsequent embryo development arrested at the 6-cell stage (8.7%) in E1 and 5-cell stage (7.1%) in E2 but proceeded to blastocyst stage (27.3%) in the control. For whole mount specimens, donor nuclei caused premature chromosome condensation in enucleated oocyte cytoplasm, and decondensation due to activation was seen, so injected donor nuclei reconstruction had occurred. No difference was seen between E2 and E1 embryo development and whole mount specimens, but E1 PN rate was clearly higher than that of E2. So 2 h of reprogramming time is more appropriate than 4 h. In this study, most NT embryos arrested at the 4-cell stage. These results suggest that development did not proceed beyond MET (maternal-embryonic transition) which is believed to occur between the 4- and 8-cell stage in cynomolgus monkey. Further study will be necessary to find the condition that completely reprograms injected donor nuclei for cloned embryo production. Table 1. Development of cynomolgus monkey fibroblast nuclear transfer embryos This work was supported by grants from the ministry of Education, Science, Sports, and Culture (13358014, 14380382).
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».