RACE and RAGE Cloning in Parasitic Microbial Eukaryotes
Notice bibliographique
Résumé
Many gene-cloning strategies and gene survey often provide partial sequence data. To exploit the information from these partial sequences numerous PCR-based approaches have been developed to clone full-length open reading frames. These approaches can be successful using small quantities of cDNA or genomic DNA as starting material and avoid the need to go through the complex and tedious process of constructing and screening gene libraries. Here we present two of these approaches, called RACE and RAGE, we used to successfully clone partial and full-length ORFs from amitochondriate parasitic microbial eukaryotes. The RACE approach uses cDNA as template for PCR cloning whereas RAGE uses genomic DNA. These two approaches were used to complement each other to provide full-length genes. The amitochondriate microbial eukaryotes we are investigating are of interest from both evolutionary and biomedical perspectives. We have investigated genes of mitochondrial origins in the obligate intracellular parasite called microsporidia. In these organisms spores are the only source of material that can be isolated from host cells and typically yield small amount of mRNA and genomic DNA for cloning. A full-length mitochondrial Hsp70 could be cloned and sequenced and specific antibody raised against a fusion protein. The highly specific antibody allowed us to demonstrate for the first time the presence of mitochondrial-like organelles in microsporidia.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».