Determination of protein concentration in skeletal muscle using two spectrophotometric assays: the Lowry and the Bradford
Notice bibliographique
Résumé
Background: Laboratory research often involves protein analysis, particularly for the comparison of protein expression and activity. Therefore, determination of protein concentration is an important first step prior to biochemical analyses. The Lowry and Bradford methods for protein determination are the most commonly used today, yet vary in several aspects. To date, no comparisons have been made in skeletal muscle tissue. Objective: We compared protein concentrations of mouse red and white gastrocnemius (N = 52), range of linearity, reagent stability and protein stability, using both the Lowry and Bradford assays. Results: Protein concentration determined by the Lowry (mean ± SD: 5.95 ± 1.45 mg/ml) was on average 15% higher than the Bradford (5.08 ± 1.31 mg/ml). We found a moderate correlation (r = 0.36, P = 0.01) with a slope of 0.39 ± 0.15 between the two methods. However, the Bland‐Altman test revealed a considerable bias (15.8 ± 29.7%; range: −42% to +74%). The linear range of concentration was smaller for the Lowry (0.05–0.50 mg/ml) than the Bradford (0–2.0 mg/ml). Lowry reagents were more stable over an hour than those of the Bradford (5.6% vs. 14.6% difference, respectively). Peak protein concentrations were reached immediately with the Lowry assay, and between 7–10 min with the Bradford assay. Conclusion: We have determined that although both the Lowry and Bradford assays measure protein concentration in skeletal muscle, the two methods are not interchangeable. Both methods have various strengths and weaknesses and should be considered before analysis. (This research was supported by the Hamilton Health Sciences Foundation and Faculty of Health‐York University).
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,019 | 0,016 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,005 | 0,003 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,004 | 0,003 |
| Bibliométrie | 0,010 | 0,007 |
| Études des sciences et des technologies | 0,002 | 0,004 |
| Communication savante | 0,004 | 0,005 |
| Science ouverte | 0,006 | 0,003 |
| Intégrité de la recherche | 0,004 | 0,006 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,004 | 0,008 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».