Development of a thermally responsive peptide for sustained deliver of solyble TNF receptor II to attenuate inflammatory events associated with radiculopathys
Notice bibliographique
Résumé
Background: Tumor necrosis factor alpha (TNFα) is a cytokine that may mediate inflammatory histopathology of the dorsal root ganglion following lumbar disc herniation.1 Soluble TNF receptor II (sTNFRII) competitively binds TNFa with clinical value for painful radiculopathy.2 Bioactive peptides expressed with elastin-like polypeptides (ELP) fusion partners gain a thermally responsive domain, by which they can undergo hydrophobic collapse and separate from solution to aggregate at physiological temperatures.3 Protein release from such a depot may locally sustain drug presence, an effect demonstrated for non-fusion ELP after intra-articular injection.4 Methods: We expressed sTNFRII fused to ELP to demonstrate potential bidomain functionality. Protein Expression. A gene encoding ELP-(VPGVG)60 was subcloned adjacent to the sTNFRII and transformed into E.coli for expression.5 Protein Safety. Endotoxin content of purified fusion protein was evaluated using a limulus amebocyte lysate endpoint assay and compared to non-fusion ELP using a two-tailed Student’s t-test. Thermal Responsiveness. Dynamic light scattering evaluated the inverse thermal phase transition behaviour of ELP-sTNFRII, and absorbance spectrophotometry quantified the in vitro depot release at 37°C. Fusion Domain Function. Anti-TNFα bioactivity was assessed by the in vitro inhibition of TNFα-induced glutamate production by microglia. Single-factor ANOVA analyzed treatment differences for ELP-sTNFRII, commercial sTNFRII (positive control), and non-fusion ELP (negative control). A 44 kDa recombinant fusion protein was expressed from E. coli and purified by inverse transition cycling. Results: Measured endotoxin content for ELP-sTNFRII was comparable to ELP alone (p < 0.01), well below FDA levels for biomedical implants. The fusion protein underwent a thermally-induced phase transition and formed observable aggregates of ~240 nm upon heating to physiological temperatures (Tt = 32°C). Slow release was observed from this depot with a time constant of 21 ± 3 hours. The fusion protein demonstrated anti-TNFα activity in vitro by attenuating TNFα-induced microglial glutamate production, albeit requiring a greater concentration than the free antagonist to achieve the same effect.(p < 0.01). Conclusion: Fusion of a sTNFRII protein to an ELP can serve to generate a thermally-induced drug depot that may sustain anti-cytokine activity of agents delivered locally to a nerve region. Further directions may involve studying in vivo biodistribution after perineural delivery of ELP and in vivo disease modifying activity of this agent.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
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Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».