Optimization of culture conditions for porcine corneal endothelial cells.
Notice bibliographique
Résumé
PURPOSE: To optimize the growth condition of porcine corneal endothelial cells (PCEC), we evaluated the effect of coculturing with a feeder layer (irradiated 3T3 fibroblasts) with the addition of various exogenous factors, such as epidermal growth factor (EGF), nerve growth factor (NGF), bovine pituitary extract (BPE), ascorbic acid, and chondroitin sulfate, on cell proliferation, size, and morphology. METHODS: PCEC cultures were seeded at an initial cell density of 400 cells/cm(2) in the presence or absence of 20,000 murine-irradiated 3T3 fibroblast/cm(2) in the classic media Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) supplemented with 20% fetal bovine serum (FBS). Mean cell size and bromodeoxyuridine incorporation was assessed at various passages. Growth-promoting factors were studies by seeding PCEC at 8,000 cells/cm(2) in DMEM with 20% FBS or Opti-MEM I supplemented with 4% FBS and one of the following additives: EGF (0.5, 5, 25 ng/ml), NGF (5, 20, 50 ng/ml), BPE (25, 50, 100, 200 microg/ml), ascorbic acid (10, 20, 40 microg/ml) and chondroitin sulfate (0.03, 0.08, 1.6%), alone or in combination. Cell number, size and morphology of PCEC were assessed on different cell populations. Each experiment was repeated at least twice in three sets. In some cases, cell cultures were maintained after confluence to observe post-confluence changes in cell morphology. RESULTS: Co-cultures of PCEC grown in DMEM 20% FBS with a 3T3 feeder layer improved the preservation of small polygonal cell shape. EGF, NGF, and chondroitin sulfate did not induce proliferation above basal level nor did these additives help maintain a small size. However, chondroitin sulfate did help preserve a good morphology. BPE and ascorbic acid had dose-dependent effects on proliferation. The combination of BPE, chondroitin sulfate, and ascorbic acid significantly increased cell numbers above those achieved with serum alone. No noticeable changes were observed when PCEC were cocultured with a 3T3 feeder layer in the final selected medium. CONCLUSIONS: Improvements have been made for the culture of PCEC. The final selected medium consistently allowed the growth of a contact-inhibited cell monolayer of small, polygonal-shaped cells.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».