Spectroscopic characterization of the conformational adaptability of <i>Bombyx mori</i> apolipophorin III
Notice bibliographique
Résumé
Apolipophorin III (apoLp-III) from the silkmoth, Bombyx mori, has been over-expressed in Escherichia coli, purified and characterized. Far-UV CD spectroscopic analysis revealed 65% alpha-helix secondary structure. Near-UV CD spectra obtained in buffer or complexed with dimyristoylglycerophosphocholine (DMPC), provided evidence that apoLp-III alpha-helices reorient upon interaction with lipid, indicative of a protein conformational change. In guanidine hydrochloride (GdnHCl) denaturation studies, a transition midpoint of 0.33 M was observed, corresponding to a DeltaGDH2O = 2.46 kcal. mol-1. Fluorescence studies of the sole tryptophan residue (Trp40) in apoLp-III revealed an emission lambdamax = 327 nm. Compared to free tryptophan, Stern-Volmer constants (KSV) for acrylamide and KI quenching of Trp40 fluorescence were decreased by 20-fold and sevenfold, respectively. In studies of apoLp-III-DMPC disc complexes, far-UV CD spectroscopy revealed an increase in alpha-helix content to approximately 85% and a ninefold increase in the GdnHCl-induced denaturation transition midpoint to 3 M. In studies of lipid interaction, apoLp-III was shown to disrupt both negatively charged and zwitterionic phospholipid bilayer vesicles, transforming them into discoidal complexes. Characterization of apoLp-III-DMPC discs, using 5-doxyl or 12-doxyl stearic acid as lipid-based quenching agents, revealed that Trp40 localizes near the phospholipid polar head groups. KSV values for acrylamide and KI quenching of intrinsic fluorescence of apoLp-III-DMPC discs indicate that Trp40 is embedded in the lipid milieu, with little or no accessibility to the aqueous quenchers. Given the large amount of alpha-helix in apoLp-III, the data presented support a model in which amphipathic alpha-helical segments are stabilized by helix-helix interactions and lipid association induces a protein conformational change which results in substitution of helix-helix interactions for helix-lipid contacts.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».