Differential mechanism‐based labeling and unequivocal activity assignment of the two active sites of intestinal lactase/phlorizin hydrolase
Notice bibliographique
Résumé
Milk lactose is hydrolysed to galactose and glucose in the small intestine of mammals by the lactase/phlorizin hydrolase complex (LPH; EC 3.2.1.108/62). The two enzymatic activities, lactase and phlorizin hydrolase, are located in the same polypeptide chain. According to sequence homology, mature LPH contains two different regions (III and IV), each of them homologous to family 1 glycosidases and each with a putative active site. There has been some discrepancy with regard to the assignment of enzymatic activity to the two active sites. Here we show differential reactivity of the two active sites with mechanism-based glycosidase inhibitors. When LPH is treated with 2',4'-dinitrophenyl 2-deoxy-2-fluoro-beta-D-glucopyranoside (1) and 2', 4'-dinitrophenyl-2-deoxy-2-fluoro-beta-D-galactopyranoside (2), known mechanism-based inhibitors of glycosidases, it is observed that compound 1 preferentially inactivates the phlorizin hydrolase activity whereas compound 2 is selective for the lactase active site. On the other hand, glycals (D-glucal and D-galactal) competitively inhibit lactase activity but not phlorizin hydrolase activity. This allows labeling of the phlorizin site with compound 1 by protection with a glycal. By differential labeling of each active site using 1 and 2 followed by proteolysis and MS analysis of the labeled fragments, we confirm that the phlorizin hydrolysis occurs mainly at the active site located at region III of LPH and that the active site located at region IV is responsible for the lactase activity. This assignment is coincident with that proposed from the results of recent active-site mutagenesis studies [Zecca, L., Mesonero, J.E., Stutz, A., Poiree, J.C., Giudicelli, J., Cursio, R., Gloor, S.M. & Semenza, G. (1998) FEBS Lett. 435, 225-228] and opposite to that based on data from early affinity labeling with conduritol B epoxide [Wacker, W., Keller, P., Falchetto, R., Legler, G. & Semenza, G. (1992) J. Biol. Chem. 267, 18744-18752].
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».