Notice bibliographique
Résumé
Two-photon excitation fluorescence cross-correlation spectroscopy (TPE-XCS) is a very suitable method for studying interactions of two distinctly labeled fluorescent molecules. As such, it lends itself nicely to the study of ligand-receptor interactions. By labeling the ligand with one color of fluorescent dye and the receptor with another, it is possible to directly monitor ligand binding rather than inferring binding by monitoring downstream effects. One challenge of the TPE-XCS approach is that of separating the signal due to the receptor from that of the ligand. Using standard organic fluorescent labels there is almost inevitably spectral cross talk between the detection channels, which must be accounted for in TPE-XCS data analysis. However, using quantum dots as labels for both ligand and receptor this limitation can be alleviated, because of the dot's narrower emission spectra. Using solely quantum dots as fluorescent labels is a novel approach to TPE-XCS, which may be generalizable to many pairs of interacting biomolecules after the proof of principle and the assessment of limitations presented here. Moreover, it is essential that relevant pharmacological parameters such as the equilibrium dissociation constant, K(d), can be easily extracted from the XCS data with minimal processing. Herein, we present a modified expression for fractional occupancy based on the auto- and cross-correlation decays obtained from a well-defined ligand-receptor system. Nanocrystalline semiconductor quantum dots functionalized with biotin (lambda(em) = 605 nm) and streptavidin (lambda(em) = 525 nm) were used for which an average K(d) value of 0.30 +/- 0.04 x 10(-9) M was obtained (cf. native system approximately 10(-15)). Additionally, the off-rate coefficient (k(off)) for dissociation of the two quantum dots was determined as 5 x 10(-5) s(-1). This off-rate is slightly larger than for native biotin-streptavidin (5 x 10(-6) s(-1)); the bulky nature of the quantum dots and restricted motion/orientation of functionalized dots in solution can account for differences in the streptavidin-biotin mediated dot-dot binding compared with those for native streptavidin-biotin.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,002 | 0,001 |
| Communication savante | 0,000 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».