33 PRODUCTION OF TRANSGENIC-CLONED PIGS CARRYING HDAF, GnT-III AND HETEROZYGOUSLY DISRUPTED a-1,3-GALACTOSYLTRANSFERASE GENES
Notice bibliographique
Résumé
In pig-to-human xenotransplantation, transplants are rapidly rejected by binding of human natural antibodies to porcine xenoantigen, mostly Gal a-1-3Gal oligosaccharides, and subsequent complement attack. To overcome this rejection, we so far have produced transgenic pigs expressing both human CD55/DAF (decay-accelerating factor, a complement-regulatory protein) and GnT-III (N-acetylglucosaminyltransferase III, a sugar chain modifying enzyme). In the present study, we heterozygously disrupted the a-1,3-galactosyltransferase (GT) gene, which catalyses the biosynthesis of Gal a-1-3Gal epitopes, in the fetal fibroblast cells from the DAF/GnT-III transgenic pigs by homologous recombination, and successfully produced GT-knockout pigs by nuclear transfer. Fibroblast cells isolated from Day 30 fetuses of DAF/GnT-III transgenic pigs were transfected with a GT-targeting vector. The targeting event in drug-resistant colonies was confirmed by PCR analysis, and targeted cells were used as nuclear donors. The reconstructed embryos were electrically activated and transferred to estrus-synchronized recipient pigs. At pregnancy Day 27 of gestation, fetuses were collected and their fibroblast cells were isolated for secondary nuclear transfer. The genomic DNA of live-born piglets produced by the secondary nuclear transfer were analyzed for the presence of DAF and GnT-III genes as well as the heterozygous disruption of the GT gene. From a total of 5.5 × 107 cells transfected with the GT-targeting vector, 2,749 drug-resistant colonies were obtained. Eighteen colonies were judged positive for targeting events by PCR analysis. After transfer of 321 cloned embryos reconstructed with the knockout cells to three recipients, four knockout fetuses were obtained from one recipient. Transfer of 633 cloned embryos reconstructed with the knockout fibroblast cells from one knockout fetus to six recipients gave rise to two live knockout piglets. PCR analysis of genomic DNA confirmed that the cloned piglets carried both DAF and GnT-III transgenes as well as the heterozygously disrupted GT gene.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».