PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF THE 20S PROTEASOME FROM THEALGA <i>CHARA CORALLINA</i> (CHAROPHYCEAE)<sup>1</sup>
Notice bibliographique
Résumé
We purified the 20S proteasome from the alga Chara corallina Willd with DEAE–ion‐exchange column chromatography and preparative nondenaturing PAGE. The analysis of the purified enzyme bynondenaturing PAGE gave a single band whose molecular mass was estimated to be about 600,000 Da by gel permeation chromatography and whose isoelectric point was at pH 5.5. Two‐dimensional gel electrophoresis gave at least 12 spots with molecular masses from 26,000 to 32,000 Da in a wide range of isoelectric points. The 20S proteasome hydrolyzed three types of artificial substrates used to differentiate chymotrypsin‐like, trypsin‐like, and peptidyl glutamyl peptidase activities. Both the chymotrypsin‐like and the peptidyl glutamyl peptidase activities were enhanced by SDS. In the presence of 0.03% SDS, the optimal pH for both activities was 8.5. Trypsin‐like activity of the 20S proteasome had a broad pH optimum in an alkaline region and was not activated but inhibited by SDS. Its chymotrypsin‐like activity was inhibited by N ‐ethylmaleimide, p ‐chloromercuribenzoic acid, and chymostatin. In contrast, its peptidyl glutamyl peptidase activity was not inhibited by chymostatin. Moreover, proteasome inhibitors MG 115 and MG 135 were effective against the chymotrypsin‐like activity and less so against the peptidyl glutamyl peptidase activity. These properties were very similar to those of the proteasomes of mammalian, yeast, and spinach cells. The large size of Chara cells will make in vivo manipulations and investigations of the proteasome proteolytic system possible.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».