Subunit-directed click coupling via doubly cross-linked hemoglobin efficiently produces readily purified functional bis-tetrameric oxygen carriers
Notice bibliographique
Résumé
While cross-linked hemoglobin (Hb) tetramers can deliver oxygen as a supplement to red cells, they also cause unacceptable increases in blood pressure, presumably from their penetration of the linings of blood vessels (endothelia) where the internal hemes bind endogenous nitric oxide (NO). This penetration would lower the local concentration of NO that normally induces vasodilation. Enlarging the effective size of the oxygen-carrying protein by coupling two Hbs can prevent their extravasation. Efficient and selective protein-protein coupling to produce those species has been a significant challenge. Introduction of an azide within a protein provides a directionally-oriented reaction site for utilization of the Cu(i)-catalyzed azide-alkyne cycloaddition (CuAAC) in the protein-protein-coupling process based on solubility-directed sequential addition to a bis-alkyne. However, it is known that Hb with an azide-containing cross-link between α-subunits is unreactive in CuAAC. To direct reaction away from the α-subunits of Hb, a specific fumaryl cross-link is installed exclusively between the most reactive sites on those subunits, thereby blocking the α-99 lysyl groups and preventing any further reaction. This modification allows installation of an azide-containing cross-link exclusively between lysine-82 ε-amino groups of the β-subunits of Hb. The multiply interconnected sites establish a geometry that permits initial interfacial interaction of the cross-linked Hb-azide with Cu(i) and a bis-alkyne. After coupling, the protein-linked azide product undergoes CuAAC at the remaining alkyne with a second cross-linked Hb-azide, producing a fully functional cross-linked Hb bis-tetramer whose oxygenation and structural properties include cooperativity and oxygen affinity that should be suitable for testing as an alternative to red cells in transfusions.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».