An in solution assay for interrogation of affinity and rational minimer design for small molecule-binding aptamers
Notice bibliographique
Résumé
Aptamers are short single-stranded oligonucleotides that fold into unique three-dimensional structures, facilitating selective and high affinity binding to their cognate targets. It is not well understood how aptamer-target interactions affect regions of structure in an aptamer, particularly for small molecule targets where binding is often not accompanied by a dramatic change in structure. The DNase I footprinting assay is a classical molecular biology technique for studying DNA-protein interactions. The simplest application of this method permits identification of protein binding where DNase I digestion is inhibited. Here, we describe a novel variation of the classical DNase I assay to study aptamer-small molecule interactions. Given that DNase I preferentially cleaves duplex DNA over single-stranded DNA, we are able to identify regions of aptamer structure that are affected by small molecule target binding. Importantly, our method allows us to quantify these subtle effects, providing an in solution measurement of aptamer-target affinity. We applied this method to study aptamers that bind to the mycotoxin fumonisin B1, allowing the first identification of high affinity putative minimers for this important food contaminant. We confirmed the binding affinity of these minimers using a magnetic bead binding assay.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».