In situ calibration and [H<sup>+</sup>] sensitivity of the fluorescent Na<sup>+</sup>indicator SBFI
Notice bibliographique
Résumé
Despite the popularity of Na+-binding benzofuran isophthalate (SBFI) to measure intracellular free Na+ concentrations ([Na+](i)), the in situ calibration techniques described to date do not favor the straightforward determination of all of the constants required by the standard equation (Grynkiewicz G, Poenie M, and Tsien RY. J Biol Chem 260: 3440-3450, 1985) to convert the ratiometric signal into [Na+]. We describe a simple method in which SBFI ratio values obtained during a "full" in situ calibration are fit by a three-parameter hyperbolic equation; the apparent dissociation constant (K(d)) of SBFI for Na+ can then be resolved by means of a three-parameter hyperbolic decay equation. We also developed and tested a "one-point" technique for calibrating SBFI ratios in which the ratio value obtained in a neuron at the end of an experiment during exposure to gramicidin D and 10 mM Na+ is used as a normalization factor for ratios obtained during the experiment; each normalized ratio is converted to [Na+](i) using a modification of the standard equation and parameters obtained from a full calibration. Finally, we extended the characterization of the pH dependence of SBFI in situ. Although the K(d) of SBFI for Na+ was relatively insensitive to changes in pH in the range 6.8-7.8, acidification resulted in an apparent decrease, and alkalinization in an apparent increase, in [Na+](i) values. The magnitudes of the apparent changes in [Na+](i) varied with absolute [Na+](i), and a method was developed for correcting [Na+](i) values measured with SBFI for changes in intracellular pH.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».