Ligand interactions and protein conformational changes of phosphopyridoxyl‐labeled <i>Escherichia coli</i> phospho<i>enol</i>pyruvate carboxykinase determined by fluorescence spectroscopy
Notice bibliographique
Résumé
Escherichia coli phosphoenolpyruvate (PEP) carboxykinase catalyzes the decarboxylation of oxaloacetate and transfer of the gamma-phosphoryl group of ATP to yield PEP, ADP, and CO2. The interaction of the enzyme with the substrates originates important domain movements in the protein. In this work, the interaction of several substrates and ligands with E. coli PEP carboxykinase has been studied in the phosphopyridoxyl (P-pyridoxyl)-enzyme adduct. The derivatized enzyme retained the substrate-binding characteristics of the native protein, allowing the determination of several protein-ligand dissociation constants, as well as the role of Mg2+ and Mn2+ in substrate binding. The binding affinity of PEP to the enzyme-Mn2+ complex was -8.9 kcal.mol-1, which is 3.2 kcal.mol-1 more favorable than in the complex with Mg2+. For the substrate nucleotide-metal complexes, similar binding affinities (-6.0 to -6.2 kcal.mol-1) were found for either metal ion. The fluorescence decay of the P-pyridoxyl group fitted to two lifetimes of 5.15 ns (34%) and 1.2 ns. These lifetimes were markedly altered in the derivatized enzyme-PEP-Mn complexes, and smaller changes were obtained in the presence of other substrates. Molecular models of the P-pyridoxyl-E. coli PEP carboxykinase showed different degrees of solvent-exposed surfaces for the P-pyridoxyl group in the open (substrate-free) and closed (substrate-bound) forms, which are consistent with acrylamide quenching experiments, and suggest that the fluorescence changes reflect the domain movements of the protein in solution.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».