Recombinant expression of antimicrobial peptides using a novel self-cleaving aggregation tag in<i>Escherichia coli</i>
Notice bibliographique
Résumé
Antimicrobial peptides (AMPs) are part of the innate immune system of complex multicellular organisms. Despite the fact that AMPs show great potential as a novel class of antibiotics, the lack of a cost-effective means for their mass production limits both basic research and clinical use. In this work, we describe a novel expression system for the production of antimicrobial peptides in Escherichia coli by combining ΔI-CM mini-intein with the self-assembling amphipathic peptide 18A to drive the formation of active aggregates. Two AMPs, human β-defensin 2 and LL-37, were fused to the self-cleaving tag and expressed as active protein aggregates. The active aggregates were recovered by centrifugation and the intact antimicrobial peptides were released into solution by an intein-mediated cleavage reaction in cleaving buffer (phosphate-buffered saline supplemented with 40 mmol/L Bis-Tris, 2 mmol/L EDTA, pH 6.2). The peptides were further purified by cation-exchange chromatography. Peptides yields of 0.82 ± 0.24 and 0.59 ± 0.11 mg/L were achieved for human β-defensin 2 and LL-37, respectively, with demonstrated antimicrobial activity. Using our expression system, intact antimicrobial peptides were recovered by simple centrifugation from active protein aggregates after the intein-mediated cleavage reaction. Thus, we provide an economical and efficient way to produce intact antimicrobial peptides in E. coli.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».