Monitoring Autophagy in <i>Drosophila</i> Using Fluorescent Reporters in the UAS-GAL4 System
Notice bibliographique
Résumé
Following autophagy induction, the autophagy-related protein Atg8 undergoes ubiquitin-like conjugation to phosphatidylethanolamine and inserts into the autophagosome membrane. Transgenic Drosophila lines expressing Drosophila Atg8 (DrAtg8a) fused to green fluorescent protein (GFP), mCherry, or dual-tagged GFP-mCherry have been constructed and are extremely useful for monitoring autophagy. The use of GFP-mCherry-Atg8a is particularly advantageous because it allows for the assessment of autophagy induction as well as autophagy flux. GFP-mCherry-Atg8a fluoresces yellow in nonacidic structures including the autophagosome. When autophagosomes fuse with lysosomes to form autolysosomes, GFP fluorescence is quenched by the acidic hydrolases and the resulting autolysosome will fluoresce red. The upstream activating sequence (UAS)-GAL4 system allows for the ectopic expression of the gene of interest (in this case, DrAtg8a) in a tissue-specific manner. Here we provide a protocol for monitoring autophagic flux by fluorescence microscopy by expressing UASp-GFP-mCherry-DrAtg8a in the Drosophila germline.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».