P0501 AN ASSAY FOR INTRACELLULAR TH1/TH2 CYTOKINE MEASUREMENT IN WHOLE BLOOD FOR FOOD PROTEIN HYPERSENSITIVITY
Notice bibliographique
Résumé
Introduction: The diagnosis of milk and other food protein allergies is often difficult to confirm in non type I (IgE negative) reactions. Reliance on results of food exclusion diets is often misleading and placebo controlled food allergen challenges are impractical. Aim: To establish a reproducible, practical and reliable in vitro cytokine assay using peripheral blood as a potential diagnostic tool for food allergies. Methods: Heparinized whole blood was diluted (1:1) in RPMI 1640 medium. For mitogen control wells, PMA and calcium ionophore were added. For allergen stimulation, either Betalactoglobulin (BetaLG), casein (CAS) or ovalbumin (OVA), each at 500mug/ml, was added to separate wells in duplicate for 24, 48 or 72 hours. Subsequently, a protein transport inhibitor (Golgi-Stop) was added for the final 4 hours of incubation. At the end of the stimulation culture period, erythrocytes were then lysed and the remaining cells were resuspended in PBS with 1% BSA. Cell surface staining was carried out using antibodies to CD4 and CD8. The cells were then suspended in a fixative (Cytofix/Cytoperm), and washed. Intracellular cytokine straining was then carried out using specific antibodies to IL-4, Il-5, Il-13, IFNgamma, and TNFalpha. In order to evaluate T cell activation, FastImmune CD69/CD3 was used in separate wells. Results were then analyzed by flow cytometry. Results: Optimal results were obtained at 24 hours, with increased markers of T cell activation (CD69+/CD3+) and cytokine staining in response to BetaLG (representative experiment shown in Table).Table 1: Position Mononuclear CellsConclusion: Intracellular staining of T cells derived from whole blood with autologous serum after stimulation in vitro with food allergens for 24 hours is a reproducible and practical method to examine food hypersensitivity in vitro. The clinical reliability of this test in terms of predicting food challenge results is under study.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,002 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,003 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,003 | 0,002 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,002 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,003 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,015 | 0,008 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».