In Situ Measurements of the pH of Mammalian Peroxisomes Using the Fluorescent Protein pHluorin
Notice bibliographique
Résumé
Peroxisomes are metabolically active organelles that participate in the oxidation of long-chain fatty acids and in the biosynthesis of bile acids, cholesterol, and ether phospholipids. Even though maintenance of a stable acid-base milieu is essential for proper peroxisomal function, the determination of the peroxisomal pH (pH(p)) remains inconclusive, and little is known about its regulation. To measure the pH of intact peroxisomes in situ, we used the peroxisome-specific carboxyl-terminal targeting sequence, SKL, to deliver a pH-sensitive mutant of the green fluorescent protein (pHluorin-SKL) selectively into peroxisomes. Proper targeting was verified by colocalization with the peroxisomal marker catalase. Peroxisomes were visualized by imaging fluorescence microscopy, and ratiometric measurements were combined with calibration using ionophores or a null-point method to estimate pH(p). The pH(p) was between 6.9 and 7.1, resembling the cytosolic pH. Manipulation of the cytosolic pH in intact cells or after permeabilization of the plasmalemma with streptolysin O revealed that pH(p) changed in parallel, suggesting that the peroxisomal membrane is highly permeable to H(+) (equivalents). We conclude that peroxisomes do not regulate their pH independently, but instead their large H(+) permeability effectively connects them with the buffer reservoir of the cytoplasm and with the homeostatic mechanisms that control cytosolic pH.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».