GAP1(IP4BP)/RASA3 Mediates Gαi-induced Inhibition of Mitogen-activated Protein Kinase
Notice bibliographique
Résumé
The dopamine D2S receptor (short isoform) couples to inhibitory Galphai/o proteins to inhibit thyrotropin-releasing hormone (TRH)-stimulated p42/p44 mitogen-activated protein kinase (ERK1/2) phosphorylation in GH4ZR7 rat pituitary cells, consistent with its actions to inhibit prolactin gene transcription and cell proliferation. However, the underlying mechanism is unclear. To identify novel Galphai effectors, yeast two-hybrid screening of a GH4ZR7 cDNA library was done using constitutively active Galphai3-Q204L, and multiple clones of the RasGAP cDNA GAP1(IP4BP)/RASA3 were identified. In yeast mating assay, RASA3 preferentially interacted with activated forms of Galphai/o/z proteins, but not with Galphas. A direct interaction was indicated by in vitro pull-down assay, in which S-His-RASA3 preferentially bound guanosine 5'-O-(gamma-thio)triphosphate-activated Galphai3 and Galphai2 compared with guanosine 5'-O-(beta-thio)diphosphate-inactivated proteins. Similarly, in co-immunoprecipitation studies in HEK-293 cells, FLAG-tagged RASA3 preferentially interacted with activated mutants of Galphai3 and Galphai2 compared with wild type proteins. In GH4ZR7 cells, co-immunoprecipitation studies of endogenous proteins demonstrated a Galphai3-RASA3 complex that was induced upon TRH/D2S receptor co-activation. To address RASA3 function in dopamine D2S receptor-induced inhibition of ERK1/2 activity, endogenous RASA3 protein expression was suppressed (70% knockdown) in GH4ZR7 cells stably transfected with full-length antisense cDNA of RASA3. The selected antisense clones had similar levels of dopamine D2S receptor binding and D2S-induced inhibition of cAMP formation compared with parental GH4ZR7 cells. In these clones, D2S-mediated inhibition of TRH-induced phospho-ERK1/2 was reversed by 70-80% compared with parental GH4ZR7 cells. Our results provide a novel mechanism for dopamine D2S-induced inhibition of ERK1/2 and indicate that RASA3 links Galphai proteins to inhibit Gq-induced Ras/ERK1/2 activation.
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Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
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score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
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