Isolation and bioinformatic analysis of seven genes encoding potato apyrase. Bacterial overexpresssion, refolding and initial kinetic studies on some recombinant potato apyrases
Notice bibliographique
Résumé
Here we have isolated seven apyrase encoding cDNA sequences (StAPY4-StAPY10) from the potato variety Saturna tuber cDNA library by affecting necessary modifications in the screening protocol. The cDNA sequences were identified with a pair of primers complementary to the most conserved sequences identified in potato variety Desiree apyrase genes. Our data strongly suggest the multigenic nature of potato apyrase. All deduced amino acid sequences contain a putative signal sequence, one transmembrane region at the amino terminus and five apyrase conserved regions (ACRs) (except StAPY6). Phylogenetic analysis revealed that encoded proteins shared high level of DNA sequence identity among themselves, representing a family of proteins markedly distinct from other eukaryotic as well as prokaryotic apyrases. Two cDNA sequences (StAPY4 and StAPY6) were overexpressed in bacteria and recombinant proteins were found accumulated in inclusion bodies, even thought they were fused with thioredoxin-tag. Additionally, we present the first successful in vitro attempt at reactivation and purification of recombinant potato apyrase StAPY6. The ratio of ATPase/ADPase hydrolysis of recombinant StAPY6 was determined as 1.5:1. Unlike other apyrases the enzyme lacked ACR5 and was endowed with lower molecular weight, high specificity for purine nucleotides and very low specificity for pyrimidine, suggesting that StAPY6 is a potato apyrase, not described so far.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».