A Fluorescence-Based High-Throughput Screening Assay for the Identification of T-Type Calcium Channel Blockers
Notice bibliographique
Résumé
T-type voltage-gated Ca(2+) channels have been implicated in contributing to a broad variety of human disorders, including pain, epilepsy, sleep disturbances, cardiac arrhythmias, and certain types of cancer. However, potent and selective T-type Ca(2+) channel modulators are not yet available for clinical use. This may in part be due to their unique biophysical properties that have delayed the development of high-throughput screening (HTS) assays for identifying blockers. One notable challenge is that at the normal resting membrane potential (V(m)) of cell lines commonly utilized for drug screening purposes, T-type Ca(2+) channels are largely inactivated and thus cannot be supported by typical formats of functional HTS assays to both evoke and quantify the Ca(2+) channel signal. Here we describe a simple method that can successfully support a fluorescence-based functional assay for compounds that modulate T-type Ca(2+)channels. The assay functions by exploiting the pore-forming properties of gramicidin to control the cellular V(m) in advance of T-type Ca(2+) channel activation. Using selected ionic conditions in the presence of gramicidin, T-type Ca(2+) channels are converted from the unavailable, inactivated state to the available, resting state, where they can be subsequently activated by application of extracellular K(+). The fidelity of the assay has been pharmacologically characterized with sample T-type Ca(2+) channel blockers whose potency has been determined by conventional manual patch-clamp techniques. This method has the potential for applications in high-throughput fluorometric imaging plate reader (FLIPR(R), Molecular Devices, Sunnyvale, CA) formats with cell lines expressing either recombinant or endogenous T-type Ca(2+) channels.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,002 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».