Analysis of conditions affecting auto-phosphorylation of human kinases during expression in bacteria
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Notice bibliographique
Résumé
Bacterial over-expression of kinases is often associated with high levels of auto-phosphorylation resulting in heterogeneous recombinant protein preparations or sometimes in insoluble protein. Here we present expression systems for nine kinases in Escherichia coli and, for the most heavily phosphorylated, the characterisation of factors affecting auto-phosphorylation. Experiments showed that the level of auto-phosphorylation was proportional to the rate of expression. Comparison of phosphorylation states following in vitro phosphorylation with phosphorylation states following expression in E. coli showed that the non-physiological 'hyper-phosphorylation' was occurring at sites that would require local unfolding to be accessible to a kinase active site. In contrast, auto-phosphorylation on unphosphorylated kinases that had been expressed in bacteria overexpressing λ-phosphatase was only observed on distinct exposed sites. Remarkably, the Ser/Thr kinase PLK4 auto-phosphorylated on a tyrosine residue (Tyr177) located in the activation segment. The results give support to a mechanism in which auto-phosphorylation occurs before or during protein folding. In addition, the expression systems and protocols presented will be a valuable resource to the research community.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle