Dynamic, inter-subunit interactions between the N-terminal and central mutation regions of cardiac ryanodine receptor
Notice bibliographique
Résumé
Naturally occurring mutations in the cardiac ryanodine receptor (RyR2) have been linked to certain types of cardiac arrhythmias and sudden death. Two mutation hotspots that lie in the N-terminal and central regions of RyR2 are predicted to interact with one another and to form an important channel regulator switch. To monitor the conformational dynamics involving these regions, we generated a fluorescence resonance energy transfer (FRET) pair. A yellow fluorescent protein (YFP) was inserted into RyR2 after residue Ser437 in the N-terminal region, and a cyan fluorescent protein (CFP) was inserted after residue Ser2367 in the central region, to form a dual YFP- and CFP-labeled RyR2 (RyR2(S437-YFP/S2367-CFP)). We transfected HEK293 cells with RyR2(S437-YFP/S2367-CFP) cDNAs, and then examined them by using confocal microscopy and by measuring the FRET signal in live cells. The FRET signals are influenced by modulators of RyR2, by domain peptides that mimic the effects of disease causing RyR2 mutations, and by various drugs. Importantly, FRET signals were also readily detected in cells co-transfected with single CFP (RyR2(S437-YFP)) and single YFP (RyR2(S2367-CFP)) labeled RyR2, indicating that the interaction between the N-terminal and central mutation regions is an inter-subunit interaction. Our studies demonstrate that FRET analyses of this CFP- and YFP-labeled RyR2 can be used not only for investigating the conformational dynamics associated with RyR2 channel gating, but potentially, also for identifying drugs that are capable of stabilizing the conformations of RyR2.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».