Comparison of two glutaraldehyde immobilization techniques for solid‐phase tryptic peptide mapping of human hemoglobin by capillary zone electrophoresis and mass spectrometry
Notice bibliographique
Résumé
Stabilization of proteolytic enzymes, especially by immobilization, is of considerable interest because of their potential applications in medicine and the chemical and pharmaceutical industries. We report here a detailed comparison of two procedures for trypsin immobilization using the same homobifunctional agent, glutaraldehyde, for the purpose of peptide mapping. These methods include covalent coupling either to controlled pore glass (solid support) or via a cross-linking reaction (without any solid support). The immobilized trypsin preparations were characterized by the determination of immobilization efficiency, which ranged from 68 to > 95%, and measurement of apparent kinetic parameters toward a synthetic peptide-like substrate. Batch digestions of whole denaturated human normal adult hemoglobin (HbA) were performed to obtain peptide maps by capillary zone electrophoresis (CZE). Migration time reproducibility of the CZE maps was excellent, with a mean relative standard deviation of 1.5%. Moreover, the two immobilized enzyme preparations showed excellent reproducibility for repeated digestions. Matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI)-mass spectrometry was also used for peptide mass mapping of denaturated HbA digested using the two immobilized trypsin preparations. Even though the two immobilized trypsin preparations do not behave identically, similar sequence coverages of 57% and 61% (for the two HbA chains merged) were achieved for the support-based and cross-linked trypsin preparations, respectively.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,002 | 0,003 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,002 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».