Enzymatic Production of Bile Acid Glucuronides Used as Analytical Standards for Liquid Chromatography−Mass Spectrometry Analyses
Notice bibliographique
Résumé
The present study reports a novel method for the production and purification of analytical standards of glucuronide conjugates of bile acids, chenodeoxycholic (CDCA), lithocholic, (LCA) and hyodeoxycholic (HDCA) acids. CDCA-3G (CDCA-3-glucuronide) and -24G, LCA-3G and -24G, and HDCA-6G and -24G were enzymatically formed by using microsomes from human liver, purified by liquid chromatography, digested with recombinant beta-glucuronidase, and quantified by liquid chromatography/electrospray ionization coupled to mass spectrometry (LC-ESI/MS). The position of the glucuronosyl moiety on the bile acids was determined by analyzing the susceptibility to hydrolysis under elevated pH and temperature conditions of the standards. By using the purified analytical standards, a LC-ESI/MS/MS method was developed for the determination of these glucuronide conjugates in in vitro assays. The linearity of the assay ranged from 0.5 to 40 ng/mL for the six glucuronides, and the limit of quantification (LOQ) was 0.5 ng/mL. Intra- and interday precisions and accuracy values were all lower than 10.2%. Furthermore, processed sample stability analyses revealed that the six standards were stable at 4 degrees C for more than 24 h. This method was successfully used for the quantification of CDCA, LCA, and HDCA glucuronides formed by human liver or hepatoma HepG2 cells. In conclusion, such a method allows the purification of high-quality analytical standards of glucuronide derivatives and may easily be used for the quantification of other endo- and xenobiotics that are glucuronidated.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,003 | 0,004 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,003 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,003 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,001 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,002 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,002 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».