Development of an EliSPOT assay for detection of CMV-specific immune response
Notice bibliographique
Résumé
Introduction: The Cytomegalovirus (CMV) is the major cause of morbidity and mortality in solid organ (SOT) and bone marrow (BMT) transplantation. An early reconstitution of immune response is crucial in limiting CMV replication; on the other hand, a late reconstitution may determine CMV reactivation with possible evolution to symptomatic phase.The Enzyme-Linked Immunosorbent Spot (EliSPOT) assay is a useful tool for monitoring the CMV-specific immune response recovery in transplant patients.This study propose the development and optimization of a interferon-gamma-(IFN-γ)-based EliSPOT assay for the detection of CMV immune response. Methods: CD3 + lymphocytes were separated using Robosep (negative selection, HLA ® EasySep WB Human T Cell Enrichment Kit, Stemcell Technology,Vancouver, Canada).The EliSPOT assay was optimized using the Human IFN gamma ELISPOT Kit and a modified protocol provided by Nanogen Advanced Diagnostics (Buttigliera Alta, Italy). Different parameters were analyzed: number of cells (200,000 - 300,000), antigens (CMV peptide mix and whole CMV antigen), incubation time (18 - 20 - 22 - 24h), number of washes, incubation conditions with secondary antibody and conditions of substrate development. Results: Herein we report the optimal conditions identified. 200,000 CD3+ cells per well were stimulated with CMV peptide mix antigens. Cells were stimulated for 18h at 37 °C in humidified atmosphere; wells were washed and secondary antibody was added and incubated at room temperature for 2h.After incubation a second series of washes were performed. Substrate was added and incubation for 15 minutes was carried out.The reaction was detected by plate reader AID ELISPOT (Strassberg, Germany). Conclusions:We developed an EliSPOT assay for the detection of CMV-immune response and reconstitution.All variables were compared to previous published protocols.The improvement of the EliSPOT assay for the detection of CMV-specific immune response represents the first step for result evaluation in clinical practice.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,003 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».