Rapid outer pore movements after opening in a K<sub>V</sub>1 potassium channel are revealed by TMRM fluorescence from the S3-S4 linker, and modulated by extracellular potassium
Notice bibliographique
Résumé
Fluorescence-based approaches provide powerful techniques to directly report structural dynamics underlying gating processes in Shaker KV channels. Here, following on from work carried out in Shaker channels, we have used voltage clamp fluorimetry for the first time to study voltage sensor motions in mammalian KV1.5 channels, by attaching TMRM fluorescent probes to substituted cysteine residues in the S3-S4 linker of KV1.5 (A397C). Compared with the Shaker channel, there are significant differences in the fluorescence signals that occur on activation of the channel. In addition to a well-understood fluorescence quenching signal associated with S4 movement, we have recorded a unique partial recovery of fluorescence after the quenching that is attributable to gating events at the outer pore mouth, that is not seen in Shaker despite significant homology between it and KV1.5 channels in the S5-P loop-S6 region. Extracellular potassium is known to modulate C-type inactivation in Shaker and KV channels at sites in the outer pore mouth, and so here we have measured the concentration-dependence of potassium effects on the fluorescence recovery signals from A397C. Elevation of extracellular K+ inhibits the rapid fluorescence recovery, with complete abolition at 99 mM K+, and an IC50 of 29 mM K+o. These experiments suggest that the rapid fluorescence recovery reflects early gating movements associated with inactivation, modulated by extracellular K+, and further support the idea that outer pore motions occur rapidly after KV1.5 channel opening and can be observed by fluorophores attached to the S3-S4 linker.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».