Construction and Characterization of an in-vivo Linear Covalently Closed DNA Vector Production System
Notice bibliographique
Résumé
BACKGROUND: While safer than their viral counterparts, conventional non-viral gene delivery DNA vectors offer a limited safety profile. They often result in the delivery of unwanted prokaryotic sequences, antibiotic resistance genes, and the bacterial origins of replication to the target, which may lead to the stimulation of unwanted immunological responses due to their chimeric DNA composition. Such vectors may also impart the potential for chromosomal integration, thus potentiating oncogenesis. We sought to engineer an in vivo system for the quick and simple production of safer DNA vector alternatives that were devoid of non-transgene bacterial sequences and would lethally disrupt the host chromosome in the event of an unwanted vector integration event. RESULTS: We constructed a parent eukaryotic expression vector possessing a specialized manufactured multi-target site called "Super Sequence", and engineered E. coli cells (R-cell) that conditionally produce phage-derived recombinase Tel (PY54), TelN (N15), or Cre (P1). Passage of the parent plasmid vector through R-cells under optimized conditions, resulted in rapid, efficient, and one step in vivo generation of mini lcc--linear covalently closed (Tel/TelN-cell), or mini ccc--circular covalently closed (Cre-cell), DNA constructs, separated from the backbone plasmid DNA. Site-specific integration of lcc plasmids into the host chromosome resulted in chromosomal disruption and 10(5) fold lower viability than that seen with the ccc counterpart. CONCLUSION: We offer a high efficiency mini DNA vector production system that confers simple, rapid and scalable in vivo production of mini lcc DNA vectors that possess all the benefits of "minicircle" DNA vectors and virtually eliminate the potential for undesirable vector integration events.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,002 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».