Expression and purification of an isotopically labeled aggregation prone inducible nitric oxide synthase calmodulin‐binding protein for use in nuclear magnetic resonance studies
Notice bibliographique
Résumé
Nuclear magnetic resonance (NMR) spectroscopy is an efficient method for studying the dynamics and structures of protein‐protein and protein‐peptide complexes. Calmodulin (CaM), a ubiquitous Ca 2+ ‐sensing protein, is able to bind and regulate various intracellular proteins, including the nitric oxide synthase (NOS) enzymes. The investigation of CaM bound to the CaM‐binding region of the inducible nitric oxide synthase (iNOS) isoform of NOS proved to be difficult due to the propensity of the iNOS CaM‐binding domain to aggregate when not bound to CaM. In the present study, an isotopically labeled peptide of the CaM‐binding region of iNOS has successfully been expressed and purified. The peptide identity was verified by both sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis and mass spectroscopy and further characterized by NMR spectroscopy. These results demonstrate an efficient approach for the expression and purification of individually stable isotope labeled protein complexes for NMR analysis, even if one partner is prone to aggregation or has very low solubility. This technique can also be used to label a specific type of amino acid or radiolabel all of the amino acids in one of the components participating in a protein–protein or protein–peptide complex.
Récupéré en direct depuis OpenAlex et désinversé. Les résumés ne sont pas conservés dans cette base de données : les index inversés représentent 8,6 Go des 9,3 Go de texte de la base, et le serveur dispose de 13 Go libres.
Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».