Selectively weakened binding of methotrexate by human dihydrofolate reductase allows rapid <i>ex vivo</i> selection of mammalian cells
Notice bibliographique
Résumé
Ex vivo selection of transduced hematopoietic stem cells (HSC) with drug-resistance genes offers the possibility to enrich transduced cells prior to engraftment, toward increased reconstitution in transplant recipients. We evaluated the potential of highly methotrexate (MTX)-resistant variants of human dihydrofolate reductase (hDHFR) for this application. Two subsets of hDHFR variants with reduced affinity for MTX that had been previously identified in a bacterial system were considered: those with substitutions at positions 31, 34, and/or 35, and those with substitutions at position 115. The variants were characterized for their resistance to pemetrexed (PMTX), an antifolate that is related to MTX. We observed a strong correlation between decreased binding to both antifolates, although the identity of specific sequence variations modulated the correlation. We chose a subset of hDHFR variants for tests of ex vivo MTX resistance, taking into consideration their residual specific activity and their decrease in affinity for the related antifolates. Murine myeloid progenitors and other differentiated hematopoietic cells were transduced and exposed to MTX in a nucleotide-free medium. Bone marrow (BM) cells including 15% cells infected with F31R/Q35E were enriched to 98% transduced cells within 6 days of ex vivo selection. hDHFR variant F31R/Q35E allowed a strong ex vivo enrichment upon a short exposure to MTX relative to a less resistant variant of hDHFR, L22Y. We have thus demonstrated that bacterial selection of highly antifolate-resistant hDHFR variants can provide selectable markers for rapid ex vivo enrichment of hematopoietic cells.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».