Flow cytometry to identify leukocyte sub-populations in blood and induced sputum in asthmatic and healthy volunteers exposed to diesel exhaust
Notice bibliographique
Résumé
To identify five leukocyte types (in blood and induced sputum) and bronchial epithelial cells (in sputum only) using multi-colour flow cytometry in healthy and mildly asthmatic volunteers exposed to diesel exhaust. Mild asthmatics and normal controls were recruited as study subjects. This crossover study was double-blinded, randomized and counter-balanced to the order of three conditions: diesel exhaust with anti-oxidant, diesel exhaust with placebo, or filtered air with placebo. The subjects were exposed to either filtered air or diesel exhaust (300 ug PM 2.5 /m ) in a state-of-the-art diesel exhaust exposure facility. An anti-oxidant, N-acetylcysteine (600 mg), or a placebo was taken orally for five days preceding, and on the day of the exposure. Each subject was exposed to each of the three conditions. Peripheral blood samples were taken pre-exposure, and also at 2, 6, and 30 hours after the beginning of exposure. Sputum induction was performed by inhalation of hypertonic saline according to ATS guidelines pre-exposure, and also at 6, and 30 hours after the beginning of exposure. FACSCanto II (BD Biosciences) was used for flow cytometry. A 5-colour, 12-marker (CD3/CD9/CD14/CD16/CD19/CD20/CD45/CD56/CD83/CD206/CD326/HLA-DR) combination was used to identify dendritic cells, macrophages, monocytes, neutrophils, eosinophils, and bronchial epithelial cells. Direct immunolabelling was performed on whole peripheral blood. After incubation, red blood cells were lysed. Remaining cells were washed and resuspended in PBS with 0.5% paraformaldehyde. Sputum plugs were homogenized with 0.1% DTT, filtered, and then centrifuged to remove supernatant. Sputum cells were resuspended in PBS at 1 million per mL. Direct immunolabelling was performed. After incubation, cells were washed and resuspended in PBS with 0.5% paraformaldehyde. Spectral compensation for flow cytometry was performed using an automatic calibration technique (BD CompBeads). Cellular debris was eliminated on the SSC/FSC scattergram. A gating strategy was designed to identify the leukocyte sub-populations and bronchial epithelial cells. Surface markers were chosen based on differential cell-specific expression according to existing literature.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,004 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».