A cell‐based Dkk1 binding assay reveals roles for extracellular domains of LRP5 in Dkk1 interaction and highlights differences between wild‐type and the high bone mass mutant LRP5(G171V)
Notice bibliographique
Résumé
Dkk1 is a secreted antagonist of the LRP5-mediated Wnt signaling pathway that plays a pivotal role in bone biology. Because there are no well-documented LRP5-based assays of Dkk1 binding, we developed a cell-based assay of Dkk1/LRP5 binding using radioactive (125)I-Dkk1. In contrast to LRP6, transfection of LRP5 alone into 293A cells resulted in a low level of specific binding that was unsuitable for routine assay. However, co-transfection of LRP5 with the chaperone protein MesD (which itself does not bind Dkk1) or Kremen-2 (a known Dkk1 receptor), or both, resulted in a marked enhancement of specific binding that was sufficient for evaluation of Dkk1 antagonists. LRP5 fragments comprising the third and fourth beta-propellers plus the ligand binding domain, or the first beta-propeller, each inhibited Dkk1 binding, with mean IC(50)s of 10 and 196 nM, respectively. The extracellular domain of Kremen-2 ("soluble Kremen") was a weaker antagonist (mean IC(50) 806 nM). We also found that cells transfected with a high bone mass mutation LRP5(G171V) had a subtly reduced level of Dkk1 binding, compared to wild type LRP5-transfected cells, and no enhancement of binding by MesD. We conclude that (1) LRP5-transfected cells do not offer a suitable cell-based Dkk1 binding assay, unless co-transfected with either MesD, Kremen-2, or both; (2) soluble fragments of LRP5 containing either the third and fourth beta-propellers plus the ligand binding domain, or the first beta-propeller, antagonize Dkk1 binding; and (3) a high bone mass mutant LRP5(G171V), has subtly reduced Dkk1 binding, and, in contrast to LRP5, no enhancement of binding with MesD.
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Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».