Use of a Combination of Isotopically Coded Cross-Linkers and Isotopically Coded N-Terminal Modification Reagents for Selective Identification of Inter-peptide Crosslinks
Notice bibliographique
Résumé
Cross-linking combined with mass spectrometry has great potential for determining three-dimensional structures of proteins and protein assemblies. One of the main analytical challenges of this method is the specific detection and identification of the inter-peptide crosslinks in the peptide mixture after enzymatic digestion of the cross-linked protein complex. These inter-peptide crosslinks are important because they provide the critical distance information needed for structural proteomics studies. In this paper, we demonstrate the use of isotopically coded N-terminal modification (ICNTM) in combination with isotopically coded cross-linkers (ICCL) for specific detection of inter-peptide crosslinks. Inter-peptide crosslinks contain two amino termini, compared to one in the case of free peptides, dead-end crosslinks, or intra-peptide crosslinks. Therefore, N-terminal modification with a 1:1 mixture of heavy and light isotopically coded reagents produces inter-peptide crosslinks with a distinct isotopic signature (a 1:2:1 ratio). Modification also occurs at the epsilon-amino groups of non-cross-linked lysine residues, resulting in two modifications per free lysine-containing peptide. However, if ICCL and ICNTM are used together, inter-peptide crosslinks can be distinguished from free lysine-containing peptides. Specialized software has also been developed for the analysis of ICCL + ICNTM experimental data. This procedure, combined with software for data analysis, provides a simple and rapid method for specific detection of inter-peptide crosslinks.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».