Development of glutaraldehyde‐crosslinked chymotrypsin and an in situ immobilized enzyme microreactor with peptide mapping by capillary electrophoresis
Notice bibliographique
Résumé
Immobilized proteolytic enzymes present several advantages over their soluble form, not the least of which is suppression of autoproteolysis peaks even at high enzyme-to-substrate ratios. We have made immobilized chymotrypsin by directly crosslinking it with glutaraldehyde to produce polymeric particles. Digestion of two model substrates using the particles was followed by CE peptide mapping with detection by UV absorbance or LIF. Results showed that autoproteolysis was highly suppressed and that different storage conditions of the particles in the short term (24 h) did not affect digestion of denatured BSA. As well, the chymotrypsin particles were indifferent to the presence of fluorescein groups on a casein substrate. Glutaraldehyde crosslinking of chymotrypsin inside a fused silica capillary column to make an immobilized enzyme reactor (IMER) was achieved in a series of reagent addition and washing steps, entirely automated using a commercial CE instrument. Digestion of myoglobin in the IMER for 30 min at 37°C followed by peptide mapping by CE-MS of the collected digest allowed identification of 17 chymotryptic peptides of myoglobin, or 83% primary sequence coverage.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».