T7 RNA polymerase as a self-replicating label for antigen quantification
Notice bibliographique
Résumé
Enzymes are used widely as labels in binding assays for protein analytes, because they provide signal amplification. Efforts at improving the assay sensitivity have been focused mainly on the synthesis of novel substrates, e.g. fluorogenic and chemiluminogenic ones. We report the investigation of T7 RNA polymerase (T7RP) as a label with unique characteristics for antigen quantification. In an in vitro, coupled (one-step) transcription/translation reaction, T7RP catalyzes the expression of an enzyme-coding DNA template to produce free enzyme (luciferase) in solution. We demonstrate that the generated luciferase is linearly related to the input T7RP in a range covering over four orders of magnitude. It is also shown that T7RP exhibits a significant level of self-replication (100-fold) in vitro by acting on a DNA template comprising the T7RP cDNA downstream of a T7 promoter. By combining the self-replication reaction with the expression of luciferase DNA, as low as 1400 T7RP molecules are detectable. Furthermore, the T7RP is biotinylated, complexed with streptavidin and used for antigen quantification in a microtiter well-based assay with high sensitivity and reproducibility.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,001 |
| Communication savante | 0,001 | 0,001 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».