Capillary-Scale Frontal Affinity Chromatography/MALDI Tandem Mass Spectrometry Using Protein-Doped Monolithic Silica Columns
Notice bibliographique
Résumé
Frontal affinity chromatography (FAC) interfaced with electrospray mass spectrometry (ESI-MS) has been reported as a potential method for screening of compound mixtures against immobilized target proteins. However, the interfacing of bioaffinity columns to ESI-MS requires that the eluent that passes through the protein-loaded column have a relatively low ionic strength to produce a stable spray. Such low ionic strength solvents can cause serious problems with protein stability and may also affect binding constants and lead to high nonspecific binding to the column. Herein, we report on the interfacing of bioaffinity columns to matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) MS/MS as a new platform for FAC/MS studies. Capillary columns containing a monolithic silica material with entrapped dihydrofolate reductase were used for frontal affinity chromatography of small-molecule mixtures. The output from the column was combined with a second stream containing alpha-cyano-hydoxycinnamic acid in methanol and was deposited using a nebulizer-assisted electrospray method onto a conventional MALDI plate that moved relative to the column via a computer-controlled x-y stage, creating a semipermanent record of the FAC run. The use of MALDI MS/MS allowed for buffers with significantly higher ionic strength to be used for FAC studies, which reduced nonspecific binding of ionic compounds and allowed for better retention of protein activity over multiple runs. Following deposition, MALDI analysis required only a fraction of the chromatographic run time, and the deposited track could be rerun multiple times to optimize ionization parameters and allow signal averaging to improve the signal-to-noise ratio. Furthermore, high levels of potential inhibitors could be detected via MALDI with limited ion suppression effects. Both MALDI- and ESI-based analysis showed similar retention of inhibitors present in compound mixtures when using identical ionic strength conditions. The results show that FAC/MALDI-MS should provide advantages over FAC/ESI-MS for high-throughput screening of compound mixtures.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,001 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,001 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».