Probing Alzheimer amyloid peptide aggregation using a cell-free fluorescent protein refolding method
Notice bibliographique
Résumé
Fibrillation of the Alzheimer beta-amyloid peptide (Abeta) and (or) formation of toxic oligomers are key pathological events in Alzheimer's disease. Several strategies have been introduced to identify small molecule aggregation inhibitors, and based on these methods, a number of aggregation inhibitors have been identified. However, most of these methods use chemically synthesized Abeta42 peptides, which are difficult to maintain in a monomeric state at neutral pH where anti-aggregation screening is usually carried out. We have developed a cell-free Abeta42 aggregation assay based on fluorescence protein refolding. This assay utilizes nanomolar concentrations of protein. We genetically fused Abeta42 to the N-terminus of vYFP, a variant of of GFP, and expressed and purified the folded fusion protein. The refolding efficiency of Abeta42-vYFP fusion was inversely correlated with the solubility of Abeta42. Using fluorescence to monitor refolding of Abeta42-vYFP, we confirmed that Zn2+ binds to Abeta42 and increases its aggregation. The IC50 value estimated for Zn binding is 3.03 +/- 0.65 micromol/L. We also show that this technique is capable of monitoring the aggregation of chemically synthesized Abeta42.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,001 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».