WaaL of <i>Pseudomonas aeruginosa</i> utilizes ATP in <i>in vitro</i> ligation of O antigen onto lipid A‐core
Notice bibliographique
Résumé
waaL has been implicated as the gene that encodes the O-antigen ligase. To date, in vitro biochemical evidence to prove that WaaL possesses ligase activity has been lacking due to the difficulty of purifying WaaL and unavailability of substrates. Here we describe the purification of WaaL, a membrane protein with 11 potential transmembrane segments from Pseudomonas aeruginosa, and the development of an in vitro O-antigen ligase assay. WaaL was expressed in a P. aeruginosa wbpL knockout strain, which is defective in its initial glycosyltransferase for O-antigen biosynthesis. This approach allowed the purification of WaaL without contaminating O-antigen-undecaprenol-phosphate (Und-P) molecules. Purified WaaL resolved to a monomer (35 kDa) and a dimer (70 kDa) band in SDS-PAGE. The substrates for the O-antigen ligase assay, O-antigen-Und-P and lipid A-core were prepared from a waaL mutant. ATP at 2-4 mM is optimum for the O-ligase activity, and ATP hydrolysis by WaaL follows Michaelis-Menten kinetics. Site-directed mutagenesis analysis indicated that the periplasmic loop region of WaaL is important for ligase activity. A waaL mutant of P. aeruginosa could not be cross-complemented by waaL of Escherichia coli, which suggested that each of these proteins has specificity for its cognate core oligosaccharide.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».