CTP:Phosphocholine Cytidylyltransferase α Is a Cytosolic Protein in Pulmonary Epithelial Cells and Tissues
Notice bibliographique
Résumé
CTP:phosphocholine cytidylyltransferase (CCT) is a rate-determining enzyme in de novo synthesis of phosphatidylcholine (PC). The lung requires a steady synthesis of PC for lung surfactant of which disaturated PC is the essential active agent. Surfactant synthesis occurs in alveolar type II cells. Studies with non-pulmonary cells have suggested that CCT is both a nuclear and cytoplasmic protein. The unusual requirements of the lung for PC synthesis and, therefore, CCT activity suggest a unique mechanism of regulation and possibly localization of CCT. The localization of CCT alpha in lung epithelial cells and, of greater consequence, lung tissues are yet unknown. Three isoforms of CCT have been identified. Herein we investigated the localization of the ubiquitously expressed CCT alpha isoform. To ascertain CCT alpha localization in lungs and lung-related epithelial cells, we employed a number of localization methods. Immunogold electron microscopy using polyclonal antibodies raised to either the carboxyl terminus, catalytic domain, or amino terminus of CCT alpha localized CCT alpha mostly to the exterior plasma membrane or regions of the endoplasmic reticulum (ER) in both A549 and MLE-15 epithelial lung cell lines and primary cultures of fetal rat lung epithelial cells. In contrast to other studies, little or no nuclear labeling was observed. Indirect immunofluorescence of these cells with anti-CCT alpha antibodies resulted in a similar distribution. Indirect visualization of both hemagglutinin- and FLAG-tagged CCT alpha as well as direct visualization of enhanced green fluorescence protein-CCT alpha fusion protein corroborated a cytoplasmic localization of CCT alpha in pulmonary cells. Moreover, analysis of lung tissue from fetal and adult mouse by either immunogold electron microscopy or indirect immunofluorescence yielded a strong cytoplasmic CCT alpha signal with virtually no nuclear localization in epithelial cells lining the airways. The cytoplasmic localization of CCT alpha in type II cells was further substantiated with transgenic mice overexpressing FLAG-tagged CCT alpha using the lung-specific human surfactant protein C (SP-C) promoter. We conclude that CCT alpha does not localize to the nucleus in pulmonary tissues, and, therefore, nuclear localization of CCT alpha is not a universal event.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,001 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,001 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».