Non-specific interaction of carbon nanotubes with the resazurin assay reagent: Impact on in vitro assessment of nanoparticle cytotoxicity
Pourquoi ce travail est dans la base
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Notice bibliographique
Résumé
In vitro cytotoxicity assays are essential tools in the screening of engineered nanomaterials (NM) for cellular toxicity. The resazurin live cell assay is widely used because it is non-destructive and is well suited for high-throughput platforms. However, NMs, in particular carbon nanotubes (CNT) can interfere in assays through quenching of transmitted light or fluorescence. We show that using the resazurin assay with time-point reading of clarified supernatants resolves this problem. Human lung epithelial (A549) and murine macrophage (J774A.1) cell lines were exposed to NMs in 96-well plates in 200 μL of media/well. After 24 h incubation, 100 μL of supernatant was removed, replaced with resazurin reagent in culture media and aliquots at 10 min and 120 min were transferred to black-wall 96-well plates. The plates were quick-spun to sediment the residual CNTs and fluorescence was top-read (λEx=540 nm, λEm=600 nm). The procedure was validated for CNTs as well as silica nanoparticles (SiNP). There was no indication of reduction of resazurin by the CNTs. Stability of resorufin, the fluorescent product of the resazurin reduction was then assessed. We found that polar CNTs could decrease the fluorescence signal for resorufin, possibly through oxidation to resazurin or hyper-reduction to hydroxyresorufin. This effect can be easily quantified for elimination of the bias. We recommend that careful consideration must be given to fluorimetric/colorimetric in vitro toxicological assessments of optically/chemically active NMs in order to relieve any potential artifacts due to the NMs themselves.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle