A rapid method for assessing lipid:protein and detergent:protein ratios in membrane-protein crystallization
Notice bibliographique
Résumé
A simple procedure for rapidly measuring lipid:protein ratios and detergent concentrations at different stages of the solubilization, purification and crystallization of membrane proteins has been developed. Fourier-transform infrared spectra recorded from 10 micro l aliquots of solution using a single-bounce diamond-attenuated total reflectance apparatus exhibit characteristic bands arising from the vibrations of lipid, protein and detergent. Lipid:protein molar ratios as low as 5:1 (for a protein with a molecular weight of 300 kDa) are determined by comparing the ratio of the integrated intensity of the lipid ester carbonyl band near 1740 cm(-1) with the protein amide I band near 1650 cm(-1). Detergent concentrations at levels well below the critical micellar concentration of most detergents are determined by comparing the integrated intensities of the detergent vibrations, particularly in the 1200-1000 cm(-1) region, with a standard curve. Protein amide I band-shape analysis provides insight into the effects of detergents on protein secondary structure. The importance of monitoring detergent concentration changes during simple procedures, such as the concentration of a membrane protein by ultrafiltration, is demonstrated. This analytical tool has been used to rapidly establish protocols for minimizing lipid and detergent levels in solubilized membrane-protein samples.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,001 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,001 | 0,001 |
| Bibliométrie | 0,001 | 0,001 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,001 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».