Transgene Expression of Green Fluorescent Protein and Germ Line Transmission in Cloned Calves Derived from In Vitro-Transfected Somatic Cells1
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Notice bibliographique
Résumé
In vitro transfection of cultured cells combined with nuclear transfer currently is the most effective procedure to produce transgenic livestock. In the present study, bovine primary fetal fibroblasts were transfected with a green fluorescent protein (GFP)-reporter transgene and used as nuclear donor cells in oocyte reconstructions. Because cell synchronization protocols are less effective after transfection, activated oocytes may be more suitable as hosts for nuclear transfer. To examine the role of host cytoplasm on transgene expression and developmental outcome, GFP-expressing fibroblasts were fused to oocytes reconstructed either before (metaphase) or after (telophase) activation. Expression of GFP was examined during early embryogenesis, in tissues of cloned calves, and again during embryogenesis, after passage through germ line using semen from the transgenic cloned offspring. Regardless of the kind of host cytoplasm used, GFP became detectable at the 8- to 16-cell stage, approximately 80 h after reconstruction, and remained positive at all later stages. After birth, although cloned calves obtained through both procedures expressed GFP in all tissues examined, expression levels varied both between tissues and between cells within the same tissue, indicating a partial shutdown of GFP expression during cellular differentiation. Moreover, nonexpressing fibroblasts derived from transgenic offspring were unable to direct GFP expression after nuclear transfer and development to the blastocyst stage, suggesting an irreversible silencing of transgenes. Nonetheless, GFP was expressed in approximately half the blastocysts obtained with sperm from a transgenic clone, confirming transmission of the transgene through the germ line.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
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