His-391 of β-galactosidase (<i>Escherichia coli</i>) promotes catalyes by strong interactions with the transition state
Notice bibliographique
Résumé
His-391 of beta-galactosidase (Escherichia coli) was substituted by Phe, Glu, and Lys. Homogeneous preparations of the substituted enzymes were essentially inactive unless very rapid purifications were performed, and the assays were done immediately. The inactive enzymes were tetrameric, just like wild-type beta-galactosidase and their fluorescence spectra were identical to the fluorescence spectrum of wild-type enzyme. Analyses of two of the substituted enzymes that were very rapidly purified to homogeneity and rapidly assayed while they were still active (at only a few substrate concentrations so that the data could be rapidly obtained), showed that the kinetic values were very similar to the values obtained with the same enzymes that were only partially purified. This showed that the kinetics were not affected by the degree of purity and allowed kinetic analyses with partially purified enzymes so that large numbers of points could be used for accuracy. The data showed that His-391 is a very important residue. It interacts strongly with the transition state and promotes catalysis by stabilizing the transition state. Activation energy differences (deltadelta G(S) double dagger), as determined by differences in the kcat/Km values, indicated that substitutions for His-391 caused very large destabilizations (22.8-35.9 kJ/mol) of the transition state. The importance of His-391 for transition state stabilization was confirmed by studies that showed that transition state analogs are very poor inhibitors of the substituted enzymes, while inhibition by substrate analogs was only affected in a small way by substituting for His-391. The poor stabilities of the transition states caused significant decreases of the rates of the glycolytic cleavage steps (galactosylation, k2). Degalactosylation (k3) was not decreased to the same extent.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule tête enseignante, pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».