Characterization of the RNA binding energetics of the <i>Candida albicans</i> poly(A) polymerase
Notice bibliographique
Résumé
The 3' ends of eukaryotic mRNAs are characterized by the presence of a poly(A) tail, which plays a critical role in stability, transport, and translation of the mRNAs. In the present study, we report the expression, purification and enzymatic characterization of the poly(A) polymerase of Candida albicans, an important human pathogen. As a first step toward elucidating the nature of the interaction between RNA and the enzyme, fluorescence spectroscopy assays were also performed to monitor the binding of RNA to the protein. Our assays revealed that the initial interaction between RNA and the enzyme is characterized by a high enthalpy of association and that the minimal RNA binding site of the enzyme is eight nucleotides. Moreover, both the kinetics of real-time RNA binding and the contribution of electrostatic interactions to the overall binding energy were investigated. Finally, we also correlated the effect of RNA binding on protein structure, using both circular dichroism and guanidium hydrochloride-induced denaturation studies as structural indicators. Our data indicate that the protein undergoes structural modifications upon RNA binding, although the interaction does not significantly modify the stability of the protein. In addition to the determination of the energetics of RNA binding, our study provides a better understanding of the molecular basis of RNA binding by poly(A) polymerases.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».