Development of an HTS Assay for Na <sup>+</sup> , K <sup>+</sup> -ATPase Using Nonradioactive Rubidium Ion Uptake
Pourquoi ce travail est dans la base
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Notice bibliographique
Résumé
A high-throughput screening (HTS) assay was developed for the Na(+),K(+)-ATPase channel in order to study rubidium uptake as a measure of the functional activity and modulation of this exchanger. The assay uses elemental rubidium as a tracer for K(+) ions. Three cell lines were used to study the exchanger, and the assay was performed in a 96-well microtiter plate format. Rb(+) uptake was carried by the CHO-K1 cells at 37 degrees C; the maximum ion influx was at 80 min of incubation of the cell line in the medium containing 5.4 mM RbCl. The cells were incubated in Rb(+) uptake buffer (5.4 mM) and with the pump blocker ouabain for 1, 2, and 3 h, respectively. A complete block of the Rb(+) uptake was observed with a 5 mM concentration of ouabain for all the three time intervals. The ouabain 50% inhibitory concentration (IC(50)) value for CHO-K1 cell line ATPase was observed to be 298 microM after 3 h of incubation. In addition, IC(50) values of 94 and 89 microM were observed at 30 min of incubation, indicating that the protocol shows reproducible results. A Z' factor higher than 0.7 was observed in the assays. These studies extend the profile of Na(+),K(+)-ATPases and demonstrate the feasibility of this HTS assay system to screen for compounds that pharmacologically modulate the function of Na(+),K(+)-ATPase.
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Prédiction distillée sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Apprise à partir de 10 348 étiquettes directes de Codex et de 10 348 étiquettes directes de Gemma. Le mode candidate est l'union des têtes enseignantes seuillées; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont ni des étiquettes humaines ni des étiquettes directes de modèles de pointe.
Scores Codex et Gemma par catégorie
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,000 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découle