HR-MAS NMR studies of <sup>15</sup>N-labeled cells confirm the structure of the <i>O</i>-methyl phosphoramidate CPS modification in <i>Campylobacter jejuni</i> and provide insight into its biosynthesis
Notice bibliographique
Résumé
Because Campylobacter jejuni is the leading cause of bacterial food-borne gastroenteritis throughout the world, there is intense effort to determine the mechanisms of infectivity associated with this bacterium. Capsular polysaccharide (CPS) has been shown to be an important virulence factor for C. jejuni and a recent study that examined the 11168V26 strain identified several phase-variable CPS modifications including an unusual O-methyl phosphoramidate (MeOPN) group on C-3 of the GalfNAc residue. In this study, we examined the MeOPN group using homo- and hetero-nuclear high-resolution magic angle spinning (HR-MAS) NMR experiments of whole bacterial cells grown on 15NH4Cl-enriched media. 1H31P HSQC NMR experiments showed that the level of 15N labeling within the MeOPN reached 80%, and a large 1J(15N31P) scalar coupling provided direct evidence that confirmed the structure of the MeOPN as CH3OP(O)(NH2)(OR). Because 15N was also detected within the major outer membrane protein as well as the NAc and NGro groups of CPS, ammonium was concluded to be an important building block used in the synthesis of amino acids and glycan structures in C. jejuni. HR-MAS NMR studies of 15N-labeled cells revealed an unanticipated level of complexity as multiple MeOPN signals were observed within 1H-31P HSQC spectra for the 11168V26 and 11168H strains. While some signals originated from the MeOPN at C-3 of GalfNAc, others were attributed to a novel MeOPN located on D-glycero-α-L-gluco-heptopyranose. Together, these HR-MAS NMR findings shed light on nitrogen metabolism in C. jejuni, confirm the chemical structure of the MeOPN, and demonstrate that the modification occurs on both furanose and pyranose CPS sugars for this bacterium.Key words: Campylobacter jejuni, capsular polysaccharide, HR-MAS NMR, isotope labeling, phosphoramidate.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».