Mutational analysis of the C-terminal anchoring domains of <i>Streptococcus mutans</i> P1 antigen: Role of the LPXTGX motif in P1 association with the cell wall
Notice bibliographique
Résumé
The salivary agglutinin-interacting adhesin P1 of Streptococcus mutans is anchored to the cell wall via the carboxy (C) terminus, which contains a wall-associated domain, a conserved LPXTGX motif, a hydrophobic domain, and a charged tail. To further investigate the role of the C-terminal anchoring regions in cell wall sorting and anchoring, mutational analysis was performed on P1 in this study. Three truncated P1 mutants and seven site-directed mutants were generated by a polymerase chain reaction-based technique. The mutated P1 genes were returned to the P1-negative S. mutans SM3352 for expression and localization studies by ELISA and Western immunoblotting. The results showed that P1 mutants with deletion of the hydrophobic domain and charged tail, or deletion of the charged tail alone resulted in the secretion of P1 to the culture medium. Results from cellular fractionation experiments with the truncated mutants showed that P1 was not trapped in the membrane or cytoplasm. The site-directed mutants showed normal distribution of P1 to the cell surface as compared to the wild-type. However, when cell walls prepared from the site-directed mutants were boiled with SDS, P1 could be removed readily from the mutants with Thr residue in the LPNTGV motif, altered to either Ser (T1531S) or Phe (T1531F); the mutant with Thr and Gly residues altered to two Phe residues (TG1531-1532FF), and the LPNTGV-deleted mutant (LPNTGV-). In contrast, the wild-type P1 and the other three site-directed P1 mutants (P1529V, N1530I, and G1532F) could not be removed by boiling SDS. When the cell wall P1s from the wild-type, mutants P1529V, N1530I, and G1532F were reacted with an antibody directed against the hydrophobic domain and charged tail, no reaction was detected. However, P1s from mutants T1531S, T1531F, TG1531-1532FF, and LPNTGV- were recognized by the antibody, indicating that the inability of these mutated P1s to firmly link to the cell wall was the result of failure in proteolytic cleavage of the hydrophobic domain and charged tail. In summary, the results suggest that the charged tail plays a decisive role in sorting P1 to the cell surface, while the LPXTGX motif determines the nature of P1-cell wall association. The Thr residue of the LPXTGX motif is required for enzymatic processing to link P1 to the cell wall, presumably via a covalent bond.
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Comment cette classification a été obtenuedéplier
Prédiction machine sur la base complète
Imitation des enseignantsNi prévalence calibrée, ni vérité terrain. Validation humaine à venir. Le volet Gemma est une étiquette directe du modèle pour chaque travail de la base, lue sur la notice réduite au titre. Le volet Codex est un classifieur appris des 10 348 étiquettes directes de Codex et calibré sur les taux pondérés de l'échantillon; les champs sans appui suffisant ne portent aucun appel Codex. Le mode candidate est l'union des deux volets; le consensus est leur intersection. Ces sorties portent le statut machine_predicted_unvalidated et ne sont pas des étiquettes humaines.
Scores du classifieur distillé par catégorie (deux têtes)
| Catégorie | Codex | Gemma |
|---|---|---|
| Métarecherche | 0,000 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens strict) | 0,001 | 0,000 |
| Méta-épidémiologie (sens large) | 0,000 | 0,000 |
| Bibliométrie | 0,000 | 0,000 |
| Études des sciences et des technologies | 0,000 | 0,000 |
| Communication savante | 0,000 | 0,000 |
| Science ouverte | 0,000 | 0,000 |
| Intégrité de la recherche | 0,000 | 0,000 |
| Charge utile insuffisante (le modèle a refusé de juger) | 0,001 | 0,000 |
Scores machine (provisoires)
Les deux têtes enseignantes du modèle étudiant, lues sur ce travail. Un score ordonne la base pour la relecture; il n'affirme jamais une catégorie, et le statut de validation accompagne chaque rangée tel quel.
Scores de référence d'un modèle non mature (critères de maturité non atteints, 7 itérations). Un score ordonne; il n'affirme jamais une catégorie.
score_only:v0-immature-baseline · tel quel depuis la passe de notation : score_only signifie que le nombre peut ordonner les travaux, et qu'aucune étiquette de catégorie n'en découleClassification
machine, non validéePrédiction automatique; un appel candidat d’une seule source (Gemma direct ou Codex distillé), pas un consensus.
Le détail, modèle par modèle et score par score, se trouve en fin de page sous « Comment cette classification a été obtenue ».